细菌生长曲线是将少量细菌接种到一定体积的适宜新鲜培养基中,在适宜条件下培养,定期测定培养基中的菌量大肠杆菌检测,以菌量的对数为纵坐标,以生长时间为横坐标,绘制曲线。
一、细菌生长曲线的测定方法
1、菌种培养:取1株大肠埃希菌斜体,无菌操作挑取一圈青苔,插入肉浸膏蛋白胨培养基(LB),静置培养12–14h,备用.
2、准备100ml LB培养基,放入200ml锥形瓶中备用。
3、标记:取11个无菌大试管大肠杆菌检测,用记号笔标记孵育时间,即0、1.5、3、4、@ > 6、8、10、12、14、@>16 和 20 小时。
4、@>接种:用5ml无菌吸管吸取5ml大肠杆菌培养液(培养12~14h),转移到装有100ml LB溶液的锥形瓶中,混匀,取5ml将混合物放入上面标记的11个无菌大试管中。
5、孵育:在摇床上在 37°C 下摇动
6、检测:按时间取出0、1.5、3、4、@>6、8、1 0、12、14、@>16、20h试管,在600nm波长处测量细菌浓度(OD值)
7、绘制曲线:通过绘制一组测得的OD值及其对应的孵育时间,可以绘制出细菌的生长曲线。
二、细菌生长曲线测量的意义
细菌生长曲线反映了一定环境条件下液体培养中单细胞微生物的种群生长规律。大多数细菌的繁殖速度非常快。在合适的条件下,大肠杆菌细胞在一定时间内每 20 分钟分裂一次。根据生长速率的不同,生长曲线一般可分为延迟期、对数期、稳定期和衰减期。这四个时期的长短因菌株的遗传、接种量和培养条件而异。因此,通过测量微生物的生长曲线,可以了解每种细菌的生长规律,对科研和生产具有重要的指导意义。
微生物的OD值是反映细菌生长状态的指标。 OD是(光密度)的缩写,表示被检测物质吸收的光密度。通常400-700nm是微生物的测量范围,505nm是菌丝体,560nm是酵母,600nm是细菌。
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